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Jun 25, 2023

Antimikrobielle Aktivität des Lacticaseibacillus rhamnosus CRL 2244 und seine Auswirkung auf die phänotypischen und transkriptionellen Reaktionen bei Carbapenem-resistentem Acinetobacter baumannii

Scientific Reports Band 13, Artikelnummer: 14323 (2023) Diesen Artikel zitieren Metrikdetails Carbapenem-resistenter Acinetobacter baumannii (CRAB) ist ein anerkannter nosokomialer Krankheitserreger mit begrenzter Verbreitung

Wissenschaftliche Berichte Band 13, Artikelnummer: 14323 (2023) Diesen Artikel zitieren

Details zu den Metriken

Carbapenem-resistenter Acinetobacter baumannii (CRAB) ist ein anerkannter nosokomialer Krankheitserreger mit begrenzten Antibiotika-Behandlungsmöglichkeiten. Milchsäurebakterien (LAB) stellen eine vielversprechende therapeutische Alternative dar. Hier untersuchten wir die antibakteriellen Eigenschaften einer Sammlung von LAB-Stämmen mithilfe einer phänotypischen und transkriptomischen Analyse gegen klinische A. baumannii-Stämme. Ein Stamm, Lacticaseibacillus rhamnosus CRL 2244, zeigte eine starke Hemmwirkung auf A. baumannii mit einer signifikanten Abtötungsaktivität. Rasterelektronenmikroskopische Aufnahmen zeigten Veränderungen in der Morphologie von A. baumannii mit einer verstärkten Bildung von Vesikeln der Außenmembran. Es wurden auch signifikante Veränderungen im Expressionsniveau einer Vielzahl von Genen beobachtet. Interessanterweise waren die meisten der veränderten Gene an einem Stoffwechselweg beteiligt, der bekanntermaßen mit dem Überleben von A. baumannii verbunden ist. Das Paa-Operon, das Hut-System und der Fettsäureabbau waren einige der Wege, die induziert wurden. Die Analyse zeigt die Wirkung von Lcb. rhamnosus CRL 2244 auf die Reaktion von A. baumannii, was zu bakteriellem Stress und anschließendem Zelltod führte. Diese Ergebnisse unterstreichen die antibakteriellen Eigenschaften von Lcb. rhamnosus CRL 2244 und sein Potenzial als alternative oder ergänzende Strategie zur Behandlung von Infektionen. Die weitere Erforschung und Entwicklung von LAB als Behandlungsoption könnte wertvolle Alternativen zur Bekämpfung von CRAB-Infektionen bieten.

Carbapenem-resistenter Acinetobacter baumannii (CRAB) hat in den letzten Jahren aufgrund seines raschen nosokomialen Auftretens und seiner weltweiten Ausbreitung an Berühmtheit gewonnen. CRAB verursacht bei gefährdeten Patienten schwere Infektionen und besiedelt bekanntermaßen auch das Rektum von Patienten und Mitarbeitern auf Intensivstationen1,2,3. Die zirkulierenden CRAB-Stämme besitzen eine extreme Antibiotikaresistenz (XDR) und in einigen Fällen eine Pan-Drug-Resistenz (PDR)4, was die Therapie mit derzeit verfügbaren Antibiotika erheblich erschwert. Im letzten Jahrzehnt und trotz zahlreicher Bemühungen, therapeutische Alternativen zu finden, war die Produktion neuer Medikamente zur Behandlung von durch CRAB verursachten Infektionen rar.

Milchsäurebakterien (LAB) stellen eine vielversprechende therapeutische Alternative dar, da bestimmte LAB-Stämme nachweislich in der Lage sind, Krankheitserreger der ESKAPE-Gruppe (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa und Enterococcus faecalis) zu hemmen5,6,7 ,8,9. LAB sind grampositive Mikroorganismen, die als sicher für die Aufnahme in Lebensmittel (GRAS) gelten und häufig bei der Herstellung verschiedener fermentierter Lebensmittel verwendet werden, wo sie zum Geschmack und zur Textur des Endprodukts beitragen10,11. LAB sind in der Natur weit verbreitet und viele von ihnen sind Teil der Darmmikrobiota von Menschen und Tieren. Stämme verschiedener LAB-Arten werden aufgrund ihrer positiven Eigenschaften für die Gesundheit von Mensch und Tier als probiotische Nahrungsergänzungsmittel verwendet. Diese Vorteile reichen unter anderem von der Verbesserung der Darmgesundheit und der Immunantwort12 bis hin zur Vorbeugung von akutem und Antibiotika-assoziiertem Durchfall13 und chronischer Gastritis14,15. Die antimikrobielle Wirkung von LAB gegen Krankheitserreger stellt eine wichtige Eigenschaft bei der Auswahl potenzieller Probiotika zur Aufrechterhaltung des mikrobiellen Gleichgewichts im Darm und als Ersatz für synthetische Antibiotika dar16. Probiotische LAB wirken antagonistisch gegen Krankheitserreger und hemmen das Wachstum dieser Bakterien, indem sie (i) antimikrobielle Substanzen oder bioaktive Verbindungen produzieren7,8,9,17; (ii) indem sie ihre Nischen besetzen und/oder verdrängen (einschließlich der Verhinderung und/oder Beseitigung von Biofilmen)5; (iii) durch Förderung der Darmreifung und -integrität und Erhöhung der nicht immunabhängigen Barrierewirkung; oder durch direkte Aktivierung lymphoider Zellen, teilweise vermittelt durch Darm-assoziiertes lymphoides Gewebe (GALT-System) und (iv) Modulation lokaler sowie systemischer Immunantworten6,18,19.

Die antimikrobielle Aktivität bestimmter LAB und/oder ihrer extrazellulären Produkte gegen A. baumannii wurde beschrieben20. In einem Mausmodell einer Atemwegsinfektion wurde gezeigt, dass Streptococcus constellatus, der häufig aus der Mundhöhle isoliert wird, die Immunantwort von Mäusen verstärkt, indem er die Proliferation zytotoxischer Lymphozyten fördert, die A. baumannii eliminieren. Stanbro et al.19 zeigten, dass die topische Anwendung bestimmter Lcb-Produkte. Acidophilus ATCC 4356 und L. reuteri ATCC 23272 waren wirksam bei der Heilung von durch A. baumannii verursachten Wunden. Darüber hinaus zeigten In-vitro-Studien die antagonistische Aktivität verschiedener LAB-Stämme wie L. animalis LMEM6, L. plantarum LMEM7, L. acidophilus LMEM8, Lcb. rhamnosus LMEM9, Lcb. casei Shirota, L. plantarum LJ1R3 und L. gasseri LBM220 gegen klinische Isolate von A. baumannii MDR5,8,21,22. Zwar gibt es Hinweise darauf, dass LAB eine antagonistische Wirkung gegen A. baumannii hat, die spezifische Reaktion von A. baumannii und die Auswirkungen von LAB auf sein Überleben, seine Virulenz und seine Persistenz wurden jedoch nicht gründlich untersucht. Ziel dieser Studie ist es, die Wissenslücke hinsichtlich der Reaktion von A. baumannii auf die antagonistische Wirkung von LAB zu schließen und zu untersuchen, wie sich das Vorhandensein von LAB auf das Verhalten von A. baumannii auswirkt, um Erkenntnisse zu liefern, die zu Strategien zur Kontrolle beitragen können nosokomiale Infektionen. Hier werden wir verschiedene Aspekte des Verhaltens von A. baumannii bewerten, einschließlich seiner Wachstumsrate, Biofilmbildung, Antibiotika-Empfindlichkeit und Expression von Virulenz-assoziierten Genen.

Wir haben zunächst die Hemmwirkung von zehn verschiedenen LAB-Arten auf den antibiotikaempfindlichen repräsentativen Stamm A. baumannii A118 durch Agar-Overlay-Tests der Übernachtkultur, des gesammelten Pellets und des Überstands der LABs bewertet. In den bakteriellen Wechselwirkungstests mit festem Medium zeigten die meisten getesteten Stämme eine geringe oder keine Hemmkapazität gegenüber A118 (Tabelle 1). Allerdings wurde rund um die Kultur und das Pellet von Lcb eine starke Hemmaktivität beobachtet, die als „hoher R-Wert“ definiert wird. rhamnosus CRL 2244 (7 bzw. 7,5) (Tabelle 1). Die antagonistische Wirkung, dargestellt als willkürliche Einheiten/ml, erreichte 1600 und 1650 für Kultur und Pellet von Lcb. rhamnosus CRL 2244 (Tabelle 1) Insbesondere wurden die gleichen „starken“ Hemmhöfe auf A118 auch beobachtet, wenn serielle Verdünnungen einer Übernachtkultur von CRL 2244 auf einen Rasen mit 108 KBE des Indikatormodellstamms A118 ausgesät wurden (Abb. 1A). ).

Hemmende Wirkung von Lcb. rhamnosus CRL 2244 an klinischen A. baumannii-Stämmen. (A) Hemmwirkung auf A. baumannii A118 (AB). Die Platte der Verdünnung 10–5 zeigt den vollständig gehemmten AB-Rasen, während die Platte der Verdünnung 10–6 die Hemmhöfe um die CRL 2244-Kolonien zeigt. (B) Antimikrobielle Aktivität des Kulturflecks (C), des Pellets (P) und des Zellüberstands (S) von Lcb. rhamnosus CRL 2244 auf Carbapenem-resistenten A. baumannii-Stämmen bei 16-stündiger Inkubation.

Daher Lcb. rhamnosus CRL 2244 wurde ausgewählt, um seine antimikrobielle Aktivität durch Agar-Overlay gegen CRAB-Stämme aus verschiedenen klonalen Komplexen zu bewerten, die verschiedene Arten von Carbapenemasen beherbergen und eine extreme Antibiotikaresistenz (XDR) aufweisen. Darüber hinaus ist Lcb ein probiotischer Modellstamm, der häufig zur Behandlung oder Vorbeugung von Durchfall eingesetzt wird. rhamnosus ATCC 53103 (GG) wurde eingeschlossen. CRL 2244 inhibierte unter den getesteten Bedingungen die Stämme AB5075 (hypervirulenter Stamm), AMA16, AB0057, ABUH702 und AYE mit „starken“ Hemmhofdurchmessern (DHI > 20 mm); Die Hemmung des Stammes ABUH702 war jedoch schwach (DHI < 10 mm) (Abb. 1B). Der Stamm ATCC 53103 zeigte unter den getesteten Bedingungen keine antimikrobielle Aktivität gegenüber einem der untersuchten CRAB-Stämme (Daten nicht gezeigt).

Um die Tötungsaktivität von Lcb zu bewerten. rhamnosus CRL 2244 untersuchten wir die Lebensfähigkeit von AB5075 und A118 24 Stunden nach der gemeinsamen Inkubation der Zellen mit CRL 2244. Es wurden beide Zellen im Verhältnis 1:1 und in der stationären Phase (ohne Zugabe von frischem Medium) verwendet. In beiden Fällen wurde ein vollständiger Zelltod mit einer Überlebensrate von weniger als 1 × 10–9 und weniger als 1 × 10–8 für AB5075 bzw. A118 beobachtet.

Um den Time-Kill-Effekt im Laufe der Zeit zu beurteilen, wurde ein 24-Stunden-Kurs von AB5075 zusammen mit Lcb kultiviert. rhamnosus CRL2244 mit oder ohne Zugabe von frischem Medium wurde bewertet und KBE/ml zu verschiedenen Zeitpunkten aufgezeichnet (Abb. 2). AB5075-Zellen wurden mit Lcb kombiniert. rhamnosus CRL 2244 im Verhältnis 1:1 von Kulturen mit OD 600 nm = 0,1. In Abwesenheit von frischem Medium wurde der Zelltod von AB5075 bei einer kurzen Zell-Zell-Kontaktzeit von 4 Stunden beobachtet (Abb. 2A). Im Gegensatz dazu wurde bei Zugabe von frischem BHI-Medium ein Rückgang der CFU nach sechs Stunden beobachtet, wobei es nach 24 Stunden Inkubation zu einem vollständigen Zelltod kam (Abb. 2B).

Tötungsaktivität von Lcb. rhamnosus CRL 2244 auf A. baumannii AB5075. (A) Zellen wuchsen über Nacht und kombinierten sich im Verhältnis 1:1. (B) Übernachtkulturen beider Zellen im Verhältnis 1:1 unter Zugabe von frischem Medium. Beide Bedingungen wurden 24 Stunden lang bei 37 °C inkubiert und die KBE/ml wurden bei unterschiedlichen Inkubationszeiten über einen Zeitraum von 24 Stunden bestimmt. Alle Tests wurden in zweifacher Ausfertigung durchgeführt. Die statistische Signifikanz (P < 0,05) wurde durch eine Zwei-Wege-ANOVA gefolgt von Tukeys Mehrfachvergleichstest bestimmt. Die Signifikanz der Co-Kultur gegenüber CRL2244 und der Co-Kultur gegenüber AB5075 wurde angezeigt durch: * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001 und **** P < 0,0001.

Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika von AB5075 und A118, kokultiviert mit Lcb. rhamnosus CRL 2244 während 4 Stunden mit Zugabe zu frischem Medium wurde durch Scheibendiffusion und Gradientendiffusion bewertet. Das Antibiotika-Empfindlichkeitsprofil der Stämme A118 und AB5075 in Gegenwart von CRL 2244 war ähnlich wie bei den nicht exponierten Stämmen unter den getesteten Bedingungen (Daten nicht gezeigt).

Eine SEM-Analyse wurde durchgeführt, um zu untersuchen, ob A. baumannii in Gegenwart von Lcb Veränderungen auf morphologischer Ebene erfährt. rhamnosus CRL 2244. Mikroskopische Bilder zeigen, dass A. baumannii-Zellen in Abwesenheit von Lcb. rhamnosus CRL 2244 (Kontrolle) haben eine kokobakterielle Form, eine gleichmäßige Größe bei etwa 600–700 nm Länge, eine raue Oberfläche und sind homogen verteilt und in eine extrazelluläre Matrix oder einen Biofilm eingetaucht (Abb. 3). Als A. baumannii Lcb ausgesetzt wurde. rhamnosus CRL 2244 wurden Veränderungen der Bakterienoberfläche, Zellgröße und -verteilung beobachtet. Während die Oberfläche rau bleibt, nahm die Bildung von Nanoröhren und äußeren Membranvesikeln (OMVs) im Vergleich zu Kontrollzellen, die ohne Lcb gezüchtet wurden, deutlich zu. rhamnosus CRL 2244 (Abb. 3). Die Größe der Zellen ist unterschiedlich, einige behalten ihre Form, während andere eine Längenzunahme zeigen (Größen von etwa 1000 nm) (Abb. 3). Darüber hinaus wurde beobachtet, dass A. baumannii-Zellen um Lcb verteilt sind und mehrzellige dreidimensionale Konglomerate bilden. rhamnosus CRL 2244-Ketten (Abb. 3). Veränderungen in der Morphologie von Lcb. rhamnosus CRL2244 bei Interaktion mit A118 wurden nicht beobachtet.

Rasterelektronenmikroskopie von A. baumannii-Zellen in Gegenwart von Lcb. rhamnosus CRL 2244. A. baumannii-Zellkulturen wurden als Kontrolle verwendet. Die mikroskopischen Aufnahmen wurden mit einer 10.000-fachen oder 20.000-fachen Vergrößerung aufgenommen. Balken, 200 nm. Der weiße Pfeil zeigt auf ein repräsentatives Außenmembranvesikel (OMV).

Es sollte die Transkriptionsreaktion von A. baumannii bei Exposition gegenüber Lcb untersucht werden. rhamnosus CRL 2244, RNA-seq-Analyse und quantitative RT-PCR (qRT-PCR) wurden durchgeführt.

RNA-seq-transkriptomische Analyse von A. baumannii AB5075, exponiert gegenüber Lcb. rhamnosus CRL 2244 ergab 386 differentiell exprimierte Gene (DEGs) mit einem angepassten P-Wert < 0,05 und einem Fold-Change-Cutoff von log2 > 1. Diese DEGs stellen 10,19 % der gesamten Gene im AB5075-Referenzgenom dar und umfassen ein breites Spektrum von funktionale Kategorien. Unter den DEGs wurden 223 hochreguliert und 163 herunterreguliert. Zu diesen DEGs gehören insbesondere Gene, die mit verschiedenen wichtigen Funktionen verbunden sind, wie unter anderem Eisenaufnahme, Antibiotikaresistenz, Stoffwechsel, Zellwandsynthese, Virulenz, Transkriptionsregulatoren, Effluxpumpen und Motilität (Tabelle S2).

Insbesondere kommt es zu einer Zunahme der Expression von Genen, die an Stoffwechselprozessen beteiligt sind, beispielsweise am Abbau organischer Verbindungen, Aminosäuren, Fettsäuren und Kohlenhydrate (Tabelle S2, Abb. 4 und S1). Gene, von denen bekannt ist, dass sie einen Einfluss auf die Pathobiologie von A. baumannii haben und eine Rolle bei Virulenz, Immunevasion, Infektion und Antibiotikaresistenz spielen23, wie etwa das paa-Operon, werden unter Kokulturbedingungen unterschiedlich exprimiert (Abb. 4A und B). . Der PAA-Katabolismus beinhaltet die Produktion von Succinyl-CoA und Acetyl-CoA, die dann am Tricarbonsäurezyklus (TCA) teilnehmen; Es gibt eine unterschiedliche Expression von Genen, die für verschiedene Lyase-, Ligase-, Transferase- und Oxidoreduktase-Enzyme kodieren, die mit diesen Signalwegen verbunden sind (Tabelle S2 und Abb. 4A und B). Darüber hinaus wurde festgestellt, dass auch Gene des Hut-Systems (hutG, hutU, hutH), die am Histidin-Katabolismus unter Verwendung von Kohlenstoff und Stickstoff als Quelle beteiligt sind, hochreguliert sind (Abb. 4C und D). Dieses System wurde als wichtig für die Infektion mit A. baumannii identifiziert24. Weitere Gene, bei denen eine Hochregulierung festgestellt wurde, waren diejenigen, die am Acetoin/Butandiol-Katabolismus (acoA, acoB, acoC, acoD, acoN und acoR), dem Benzoatstoffwechsel (benA, benB, benC, benD, benK und benP2) und assoziierten Genen beteiligt sind mit Alkoholstoffwechsel (Abb. 4E und F, Tabelle S2 und Abb. S1).

AB5075-Transkriptionsergebnisse repräsentativer Stoffwechselwege, die von Lcb beeinflusst werden. rhamnosus CRL 2244. (A) Heatmap, die die unterschiedliche Genexpression von Genen zeigt, die am Phenylessigsäure-Katabolisierungsweg beteiligt sind. Sternchen stehen für einen P-Wert von < 0,05. (B) qRT-PCR von paaA, paaB und paaE von AB5075 wuchs auf BHI oder in Co-Kultur mit Lcb. rhamnosus CRL 2244. (C) Heatmap, die die unterschiedliche Genexpression von Hut-System-kodierenden Genen zeigt, die am Histidin-Metabolismus beteiligt sind. Sternchen stehen für einen P-Wert von < 0,05. (D) qRT-PCR von hutC, hutD, hutG, hutH, hutI, hutT und hutU von AB5057 wuchs auf BHI oder in Co-Kultur mit Lcb. rhamnosus CRL 2244. (E) Heatmap, die die unterschiedlichen Genexpressionsgene darstellt, die am Acetoin-Metabolismus beteiligt sind. Sternchen stehen für einen P-Wert von < 0,05. (F) qRT-PCR von acoA, acoB, acoC und acoR von AB5057 wuchs auf BHI oder in Co-Kultur mit Lcb. rhamnosus CRL 2244. Für qRT-PCR-Assays wurden drei unabhängige Proben verwendet. Die statistische Signifikanz (P < 0,05) wurde durch eine Zwei-Wege-ANOVA gefolgt von Tukeys Mehrfachvergleichstest bestimmt, ein Sternchen: P < 0,05; zwei Sternchen: P < 0,01 und drei Sternchen: P < 0,001.

Hinsichtlich der Veränderungen in der Expression von Genen, die am Fettsäurestoffwechsel beteiligt sind, wurde in Gegenwart von Lcb ein Anstieg der Expression von 34 Genen beobachtet. rhamnosus CRL 2244. LipA, das für die Nutzung langkettiger Fettsäuren, die Kolonisierung und die Persistenz bei einer A. baumannii-Infektion essentiell ist, gehörte zu den beobachteten DEGs (Tabelle S2 und Abb. S1).

Eine Herunterregulierung wurde bei der Expression von Genen beobachtet, die mit Sekretionssystemen, Biofilm und Eisenstoffwechsel in Zusammenhang stehen, während eine Hochregulierung bei Antibiotikaresistenz-assoziierten Genen beobachtet wurde (Abb. 5A–E und Tabelle S2). Übernachtkulturen von AB5075, Lcb. rhamnosus CRL 2244 und AB5075 kombiniert mit Lcb. rhamnosus CRL 2244 für 24 Stunden wurden zur Beurteilung der Biofilmbildung verwendet. Bei der Co-Kultivierung von AB5075 und Lcb wurde ein statistisch signifikanter Rückgang der Biofilmproduktion beobachtet. rhamnosus CRL 2244 (Abb. S2). Es wurde ein Anstieg der Expression von Genen im Zusammenhang mit Effluxpumpen und Antibiotikaresistenz beobachtet (Abb. 5D–E). Ausgewählte Gene wurden durch qRT-PCR-Assays bewertet, die keine statistisch signifikanten Veränderungen ergaben oder Ergebnisse zeigten, die sowohl mit den RNA-seq-Daten übereinstimmten als auch nicht damit übereinstimmten (Abb. S3). Schließlich wurde festgestellt, dass Gene, die für die Proteine ​​LrgB und CidA/LgrA kodieren, deutlich überexprimiert sind (Tabelle S2). Diese Proteine ​​beeinflussen die Protonenantriebskraft der Membran und induzieren den programmierten Zelltod bei Bakterien25. Darüber hinaus wurde festgestellt, dass diese Gene am Pyruvat-Aufnahmesystem in Streptococcus mutans beteiligt sind und eine Rolle bei der Verbindung zwischen Zelltod und wichtigen Stoffwechselwegen spielen26.

Heatmap, die die unterschiedliche Genexpression von Genen darstellt, die an Virulenz und Antibiotikaresistenz beteiligt sind. Sternchen stehen für einen P-Wert von < 0,05. (A) Typ-6-Sekretionssysteme, (B) Biofilm, (C) Eisen, (D) Effluxpumpen und (E) Antibiotikaresistenz.

Die antagonistische Aktivität von Lcb. rhamnosus CRL 2244 auf AB5075 wurde in einem komplexen Medium aus Mikroorganismen, beispielsweise menschlichem Fäkalienmaterial, bewertet. Zu diesem Zweck wurde kommerziell gewonnenes menschliches Fäkalienmaterial eines gesunden Spenders verwendet. Lcb. rhamnosus CRL 2244 beeinflusste auch die Lebensfähigkeit von AB5075 in Gegenwart einer kommensalen Mikrobiota. In der Co-Kultur mit Lcb wurde ein Rückgang der Lebensfähigkeit von AB5075 um 35 % beobachtet. rhamnosus CRL 2244 im Vergleich zur Kontrolle AB5075 (1,3 × 108 vs. 2,0 × 108 KBE/ml). Es wurden jedoch keine Veränderungen in den Phänotypen der überlebenden AB5075-Zellen (Motilität und Antibiotika-Empfindlichkeitsprofil) beobachtet. Darüber hinaus ist Lcb. rhamnosus CRL 2244 reduzierte die gesamte mikrobielle Belastung des menschlichen Stuhlmaterials um bis zu 50 % (2,0 × 108 gegenüber 4,0 × 108 KBE/ml menschlicher Stuhlkontrolle) und konnte die in der menschlichen Stuhlprobe vorhandene E. coli-Population hemmen ( Daten nicht angezeigt).

LAB kann auf eine lange Geschichte der sicheren Verwendung in Lebensmitteln zurückblicken, wo sie fermentierten Produkten die gewünschten technologischen und ernährungsphysiologischen Eigenschaften verleihen. Darüber hinaus haben bestimmte Arten positive Auswirkungen auf die Gesundheit des Wirts. Die antagonistische oder antimikrobielle Wirkung von LAB gegen Krankheitserreger ist in der Literatur gut dokumentiert5,9. Allerdings gibt es derzeit nur begrenzte Studien zur antimikrobiellen Aktivität von LAB und/oder seinen extrazellulären Produkten gegen A. baumannii7,9,27. In der vorliegenden Arbeit beobachteten wir eine starke inhibitorische Aktivität des LAB Lcb. rhamnosus CRL 2244 auf anfällige und Carbapenem-resistente A. baumannii-Stämme. Lcb. rhamnosus CRL 2244 übt sowohl in der exponentiellen als auch in der stationären Phase eine abtötende Wirkung auf A. baumannii-Zellen aus. Dennoch stammte der Überstand aus einer 24-stündigen Kultivierung von Lcb. rhamnosus CRL 2244 zeigte unter den beurteilten Bedingungen keine antimikrobielle Aktivität. Es bleibt plausibel, dass die Konzentration des/der aktiven Metaboliten im getesteten Milieu niedrig war. Es besteht jedoch die Möglichkeit, dass von Lcb freigesetzte(r) Metabolit(e) rhamnosus CRL 2244 in die Umwelt eine Wirkung entfalten könnte, bedarf weiterer Untersuchungen.

Darüber hinaus zeigte die Morphologie von A. baumannii-Zellen Veränderungen, wenn sie Lcb ausgesetzt wurden. rhamnosus CRL 2244. Zu diesen Veränderungen gehörten Variationen in der Größe, Verteilung und Menge der von A. baumannii freigesetzten OMVs, was auf eine mögliche Abwehrreaktion hindeutet und darauf hindeutet, dass A. baumannii-Zellen möglicherweise Stress ausgesetzt sind. Ladha et al.7 haben gezeigt, dass eine reine Verbindung, die von Lactiplantibacillus plantarum LJR13 produziert wird, Poren auf der Oberfläche von Listeria monocytogenes, S. aureus und A. baumannii erzeugt, die die Bakterienoberfläche beeinflussen7. Frühere Studien haben gezeigt, dass die Exposition von A. baumannii-Zellen gegenüber Milchsäure und Essigsäure, die von Lcb produziert werden. rhamnosus kann zur Zerstörung oder Auflösung der Zellhülle von A. baumannii führen. Darüber hinaus beobachteten diese Autoren die Entstehung filamentartiger Strukturen, die als Orte für den übermäßigen Austritt lebenswichtiger Zytoplasmainhalte dienen können27.

Durch unsere transkriptomische Analyse der Kokultur von A. baumannii-Zellen mit Lcb. rhamnosus CRL 2244 beobachteten wir, dass die Expression verschiedener Gene deutlich verändert ist. Interessanterweise sind die meisten differentiell exprimierten Gene (DEGs) mit Stoffwechselwegen verbunden, was darauf hindeutet, dass A. baumannii aktiv auf den durch das LAB verursachten Stress reagiert, um seine Überlebensstrategien zu verbessern. Zu den Stoffwechselwegen, bei denen festgestellt wurde, dass sie verändert sind, gehört der Abbauweg des organischen Säurephenylacetats (PAA), der bei verschiedenen biologischen Prozessen eine entscheidende Rolle spielt. Der Katabolismus von PAA wurde mit Immunumgehung, Kolonisierung, Persistenz, Biofilmbildung, oxidativem Stress und Antibiotikaresistenz in Verbindung gebracht28,29,30,31. Interessanterweise wird die Expression von Genen innerhalb des Paa-Operons durch verschiedene Umweltbedingungen beeinflusst, einschließlich der Exposition gegenüber menschlicher Pleuraflüssigkeit, Mucin und Antibiotika, was verdeutlicht, wie A. baumannii verschiedene Strategien zur Überwindung von Umweltstress einsetzt. Die erhöhte Expression des paa-Operons wurde mit der Unterdrückung des CSU-Pili in Verbindung gebracht, was zu einer geringeren Biofilmbildung führte28. Unsere RNA-seq-Daten und Biofilmbildungstests stimmen mit dieser Studie überein. In unserer Studie beobachteten wir die Hochregulierung der Gene des Hut-Systems, das dafür bekannt ist, die Verwendung von Histidin während einer Infektion zu ermöglichen. Dieser Befund verstärkt die metabolische Anpassungsfähigkeit von A. baumannii weiter, die für sein Überleben in der Wirtsumgebung von entscheidender Bedeutung ist. Der Stoffwechsel von Fettsäuren wird in Anwesenheit der LAB-Bakterien stark gesteigert. Frühere Berichte haben gezeigt, dass Wirtsfettsäuren während einer Infektion eine antimikrobielle Wirkung haben32,33,34. Andere Autoren zeigten, dass die β-Oxidation von A. baumannii die toxischen Fettsäuren metabolisieren kann, wodurch A. baumannii während einer Infektion resistent werden kann32,33,34. Es wurde auch berichtet, dass diese Art Fettsäuren als Energiequellen oder Substrat für die Membranbiosynthese nutzen kann35. Rodman et al.36 beobachteten, dass es zu einem Anstieg der Expression von Genen kommt, die mit dem Fettsäurestoffwechsel in Zusammenhang stehen, wenn A. baumannii menschlicher Pleuraflüssigkeit oder menschlichen Proteinen wie HSA ausgesetzt wird36. Die umfassende Analyse der transkriptomischen Daten zeigt, dass in Gegenwart von Lcb. rhamnosus CRL 2244, A. baumannii zeigt eine bemerkenswerte und vielseitige metabolische Anpassungsfähigkeit als direkte Reaktion auf den durch das LAB verursachten Stress. Diese Anpassungsfähigkeit weist darauf hin, dass A. baumannii die Fähigkeit besitzt, seine Stoffwechselwege dynamisch anzupassen, um auf die Herausforderungen zu reagieren, die das Vorhandensein von Lcb mit sich bringt. rhamnosus CRL 2244. Eine solche Anpassungsfähigkeit ist wahrscheinlich entscheidend für das Überleben und die Beständigkeit von A. baumannii angesichts von Umweltstressoren.

Ein weiterer bemerkenswerter Befund in der Transkriptionsreaktion von A. baumannii ist die signifikante Überexpression der Gene cidAllrgA und lrgB. Diese Gene sind am programmierten Zelltod beteiligt und wurden zuvor mit zellulären Reaktionen während des Überlaufstoffwechsels in Verbindung gebracht37. Basierend auf unseren Daten vermuten wir, dass das Vorhandensein von Lcb. rhamnosus CRL 2244 kann bei A. baumannii Stress und potenziellen Zelltod auslösen, wahrscheinlich aufgrund der unter diesen Bedingungen beobachteten erhöhten Stoffwechselaktivität. Diese Beobachtung steht im Einklang mit dem dokumentierten Phänomen, dass A. baumannii in Gegenwart von Lcb nach 24 Stunden einen Zelltod erleidet. rhamnosus CRL 2244.

Frühere Arbeiten haben gezeigt, dass Probiotika LAB ihre antimikrobielle Aktivität unter anderem durch die Freisetzung von Metaboliten wie organischen Verbindungen oder Tetramsäuren wie Reutericyclin38 oder durch die Bildung multizellulärer Koaggregate ausüben. Es wurde vermutet, dass die zelluläre Koaggregation, wie wir sie durch SEM beobachtet haben, die Besiedlung von Gewebe durch nützliche Milchsäurebakterien ermöglichen und dadurch die Anhaftung des Krankheitserregers stören würde39. Unter Berücksichtigung früherer veröffentlichter Arbeiten und der in diesem Manuskript gesammelten Daten können wir vermuten, dass A. baumannii Lcb ausgesetzt wird. rhamnosus CRL 2244 kann eine signifikante Veränderung auf Stoffwechselebene möglicherweise zum Zelltod führen. Zukünftige Studien werden sich auf die Isolierung, Charakterisierung und biologische Bewertung von Lcb konzentrieren. rhamnosus CRL 2244 Metabolie(n) zur Identifizierung spezifischer Wirkmechanismen, die zu neuen Therapeutika führen könnten. Basierend auf früherer Literatur ein möglicher Veranstaltungsort für die Nutzung des Lcb. Rhamnosus CRL 2244 oder seine Wirkstoffe können zur topischen Verabreichung zur Behandlung von Wundinfektionen eingesetzt werden40,41,42.

Die in dieser Studie präsentierten Ergebnisse zeigten, dass Lcb. rhamnosus CRL 2244 weisen Anti-A auf. Baumannii-Effekt. Darüber hinaus unterstreicht die beobachtete Fähigkeit des LAB, eine breite transkriptomische Reaktion in A. baumannii auszulösen, die komplexen Wechselwirkungen zwischen diesen Organismen. Diese Arbeit bietet eine Grundlage für zukünftige Untersuchungen, die darauf abzielen, die zugrunde liegenden Mechanismen und das Potenzial von Lcb aufzuklären. rhamnosus CRL 2244 soll zur Entwicklung neuartiger Therapiestrategien zur Bekämpfung von A. baumannii-Infektionen eingesetzt werden.

Zehn Milchsäurebakterienstämme (LAB) wurden verwendet, um ihre antimikrobielle Aktivität gegen A. baumannii zu bewerten. Die eingeschlossenen Stämme waren der probiotische Modellstamm Lacticaseibacillus rhamnosus ATCC 53103; und Stämme mit technologischen und/oder funktionellen Eigenschaften von Interesse43,44,45,46,47,48, die zur CERELA-Kultursammlung (CRL) oder zur Sammlung des Labors gehören, wie Latilactobacillus curvatus CRL705, Limosilactobacillus mucosae CRL573, Lactobacillus acidophilus CRL641, Fructobacillus tropaeolis CRL2034, Limosilactobacillus reuteri CRL1101, Companilactobacillus farciminis CRL748, Lacticaseibacillus rhamnosus CRL75, CRL 2244 und Principia (Tabelle S1). Die Stämme wurden vor der experimentellen Verwendung jeweils zweimal bei der optimalen Temperatur in Man-, Rogosa- und Sharpe-Brühe (MRS) (Oxoid, Basingstoke, Hampshire, Vereinigtes Königreich) subkultiviert.

In dieser Arbeit wurden zwei A. baumannii-Modellstämme verwendet, der antibiotikaempfindliche Stamm A11849 und der CRAB AB5075 (blaOXA-23 und blaOXA-51,50). Außerdem gehören vier weitere klinische CRAB-Stämme zu unterschiedlichen klonalen Komplexen und beherbergen unterschiedliche Arten von Carbapenemasen wie AMA16 (blaNDM-1 und blaPER-7,51), AB0057 (blaTEM-1, blaOXA-23, blaADC,52), ABUH702 (ISAba1 /OXA-6653) und AYE (blaVEB-1, blaOXA-6954) wurden getestet. Die Stämme wurden bei 37 °C in BHI-Brühe (Oxoid, Basingstoke, Hampshire, Vereinigtes Königreich) unter Rühren gezüchtet.

Die antagonistische oder inhibitorische Aktivität von LAB gegen die verschiedenen A. baumannii-Indikatorstämme wurde mit der Soft-Agar-Overlay-Methode5 bestimmt. Kurz gesagt wurden Flecken (105 KBE/Spot) der Kultur (C), des Überstands (S) und des Pellets (P) (S und P, erhalten durch 5-minütiges Zentrifugieren der Kultur bei 10.000 U/min) verschiedener LAB auf MRS-Agarplatten inokuliert. Unter Verwendung einer Kultur in MRS-Brühe (24 Stunden lang bei 37° oder 30 °C gezüchtet) und 30 Minuten lang trocknen gelassen. Anschließend wurden sie mit Muller-Hinton (MH)-Weichagar (0,8 % Agar), vorgemischt mit 108 KBE A. baumannii-Indikatorstämmen, bedeckt und 24 Stunden bei 37 °C inkubiert. Der Durchmesser des A. baumannii-Wachstumshemmhofs (IHD) wurde gemessen und gemäß Shokryazdan et al.55 interpretiert: der IHD > 20 mm (stark); 20–10 mm (mittel); und < 10 mm (schwach). Die Breite der klaren Zone oder der „R“-Wert wurde ebenfalls gemäß der Formel R = Hemmungsdurchmesser – Punktdurchmesser geteilt durch zwei5 bestimmt; und wird als „keine Hemmkapazität“ interpretiert, wenn R < 2 mm, als „geringe Hemmung“ bei „R“-Werten von 2–5 mm und als „hohe Hemmkapazität“ bei „R“-Werten > 6 mm56,57. AU/ml (willkürliche Einheiten pro ml) wurde als IHD × 1000 dividiert durch den μl-Seed5 berechnet. Die Tests wurden dreifach durchgeführt.

Die Lebensfähigkeit von A. baumannii AB5075 und A118 in Co-Kultur mit Lcb. rhamnosus CRL 2244 wurde durch a) Kombination von ON-Kulturen beider Zellen (1:1-Verhältnis von Kulturen mit OD 600 nm = 0,1) ohne Zugabe von frischem Medium und b) Kombination von 1:1-Kulturen mit OD 600 nm mit Zugabe bewertet frisches BHI-Medium, 24 Stunden bei 37 °C inkubiert. Als Kontrollen wurden unabhängige Kulturen von A. baumannii und CRL 2244 verwendet. KBE/ml wurden zu unterschiedlichen Inkubationszeiten durch Dezimalverdünnungen bestimmt und auf CLDE-Medium (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) mit und ohne Zusatz von Erythromycin (2 μg/ml) zur Abtötung von Lcb ausplattiert. rhamnosus CRL 2244. Die statistische Signifikanz (P < 0,05) wurde durch eine Zwei-Wege-ANOVA gefolgt von Tukeys Mehrfachvergleichstest unter Verwendung von GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) bestimmt.

Die Antibiotikaempfindlichkeit von AB5075, das 4 Stunden lang zusammen mit CRL 2244 kultiviert wurde, wurde anhand der Scheibendiffusion und der Gradientendiffusion (minimale Hemmkonzentration) gemäß den vom Clinical and Laboratory Standards Institute58 empfohlenen Verfahren bewertet. Kommerzielle antimikrobielle Scheiben (Liofilchem ​​Srl, Italien) mit 30 μg Cefepim (FEP), 30 μg Ceftazidim (CAZ), 10 μg Imipenem (IMP), 10 μg Meropenem (MER), 30 μg Cefiderocol (FDC), Amikacin (AK) wurden 5 μg Ciprofloxacin (CIP) verwendet und die Platten 18 Stunden lang bei 37 °C inkubiert. MHK-Bestimmungen gegen Cefiderocol (FDC) und Tetracyclin (TE) wurden von MTS (Liofilchem ​​Srl, Italien) gemäß den Empfehlungen des Herstellers durchgeführt. Die Tests wurden dreifach durchgeführt.

Aus Übernachtkulturen von A118 in BHI-Brühe (inkubiert bei 37 °C unter Schütteln) und CRL2244 in MRS-Brühe (inkubiert bei 37 °C) wurden jeweils 500 μl kombiniert (Co-Kultur) und bei 37 °C ohne Schütteln inkubiert 1 Std. 30 Min. Zu den Kontrollen gehörten Einzelkulturen beider Zellen. Anschließend wurden die Proben 2 Minuten lang bei 500 U/min zentrifugiert. Dem gesammelten Pellet wurde 1 ml Karnovsky-Fixiermittel pH 7,2 (2,66 % Paraformaldehyd, 0,1 M Natriumphosphatpuffer und 1,66 % Glutaraldehyd) zugesetzt und homogenisiert. Dann wurden 100 μl auf die Oberfläche eines Glasdeckglases mit 10 mm Durchmesser gegeben, eine Stunde lang trocknen gelassen und mit einer Reihe von Alkohollösungen mit ansteigender Abstufung 30, 50, 70, 90, 100° und Aceton jeweils 10 Minuten lang dehydriert . Nach Aceton wurde eine Trocknung am kritischen Punkt in der Denton-Vakuumanlage Modell DCP-1 durchgeführt. Die Gläser wurden auf einem Aluminiumträger (Stub) montiert und mit einem doppelseitigen leitfähigen Carbonband verklebt. Anschließend wurden sie in einem JEOL-Ionensputter Modell JFC-1100 mit Gold beschichtet. Die elektronenmikroskopische Beobachtung wurde mit dem Rasterelektronenmikroskop ZeissSupra 55VP (Deutschland) des Centro Integral de Microscopia Electronica (CIME-CONICET-Universidad Nacional de Tucumán) durchgeführt.

Übernachtkulturen von A. baumannii AB5075 und CRL 2244 mit einer auf 600 nm bei 4,0 eingestellten OD wurden zentrifugiert und in 3 ml BHI-Brühe resuspendiert und 90 Minuten bei 37 °C inkubiert. Gesamt-RNA-Extraktionen wurden in drei biologischen Replikaten für jede Bedingung (AB5075 kombiniert mit CRL 2244 und AB5075) unter Verwendung des Direct-zol RNA Kit (Zymo Research) durchgeführt. Nachdem die Abwesenheit einer DNA-Kontamination überprüft worden war, wurde Novogene Corporation (CA) mit der Durchführung einer mRNA-seq-Analyse beauftragt, die die rRNA-Depletion, die Bibliotheksvorbereitung gemäß den Protokollen des NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit für Illumina (New England Biolabs) und umfasste Illumina NovaSeq 6000 Paired-End-150-bp-Sequenzierung. Die RNA-seq-Reads (GEO-Zugang GSE236782), die A. baumannii AB5075 entsprechen, das CRL 2244 ausgesetzt war, wurden wie folgt analysiert. Zunächst wurde Trimmomatic v0.39 verwendet, um Basen geringer Qualität an den Enden der Lesevorgänge auf eine Mindestlänge von 100 bp zu kürzen und Illumina-Adaptersequenzen zu entfernen. Anschließend wurde FastQC (www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/) verwendet, um die Qualität der Lesevorgänge vor und nach dem Trimmen zu bewerten. Die RNA-seq-Reads wurden mithilfe der Burrows-Wheeler Alignment-Software (BWA) an der gesamten Genomsequenz von AB5075 ausgerichtet. FeatureCounts wurde verwendet, um die Lesezahlen pro Gen zu berechnen, und DEseq2 wurde verwendet, um eine Analyse der differentiellen Expression durchzuführen. Merkmale mit einem FDR < 0,05 und einer log2fachen Änderung > 1 wurden als statistisch signifikant angesehen.

Die extrahierte und DNase-behandelte RNA wurde zur Erzeugung komplementärer DNA (cDNA) gemäß dem Herstellerprotokoll verwendet, das mit dem iScriptTM Reverse Transcription Supermix für qPCR (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) bereitgestellt wurde. Die cDNA-Konzentrationen wurden auf 50 ng/µL eingestellt und die qPCR wurde unter Verwendung des qPCRBIO SyGreen Blue Mix Lo-ROX gemäß dem Protokoll des Herstellers (PCR Biosystems, Wayne, PA, USA) durchgeführt. Mindestens drei biologische Replikate der cDNA wurden in Tripletts verwendet und mit dem CFX96 TouchTM Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) getestet. Die Transkriptionsniveaus jeder Probe wurden auf das Transkriptionsniveau von rpoB normalisiert. Die relative Quantifizierung der Genexpression wurde mit der vergleichenden Schwellenwertmethode 2-ΔΔCt durchgeführt. Die nach der Normalisierung erhaltenen Verhältnisse wurden als fache Änderungen im Vergleich zu einzeln aus Bakterienkulturen isolierten cDNA-Proben ausgedrückt, und Sternchen wurden verwendet, um statistisch signifikante Unterschiede anzuzeigen, wie durch ANOVA gefolgt von Tukeys Mehrfachvergleichstest (P < 0,05) unter Verwendung von GraphPad Prism bestimmt ( GraphPad Software, San Diego, CA, USA).

Übernachtkulturen von AB5075, CRL 2244 und AB5075 kombiniert mit CRL 2244 wurden 24 Stunden lang in BHI bei 37 °C inkubiert. Die optische Dichte bei 600 nm (OD600) wurde auf 0,9–1,1 eingestellt und 100 μl in eine Polystyrol-Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen gegeben und 24 Stunden lang bei 37 °C ohne Schütteln inkubiert. Am nächsten Tag wurde die OD600 (ODG) mit einem Mikroplatten-Lesegerät gemessen, um die Gesamtbiomasse zu bestimmen. Die Vertiefungen wurden geleert, dreimal mit 1X phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) gewaschen und 15 Minuten lang mit 1 % Kristallviolett (CV) gefärbt. Überschüssiges CV wurde durch dreimaliges Waschen mit 1X PBS entfernt und der mit CV verbundene Biofilm wurde 30 Minuten lang in Ethanolacetat (80:20) solubilisiert. OD580 (ODB) wurde gemessen und das Verhältnis von Biofilm zur Gesamtbiomasse (ODB/ODG) bestimmt. Die Experimente wurden dreifach durchgeführt und die statistische Signifikanz (P < 0,05) wurde durch eine Zwei-Wege-ANOVA bestimmt, gefolgt von Tukeys Mehrfachvergleichstest unter Verwendung von GraphPad Prism (GraphPad-Software, San Diego, CA, USA).

Eine Stammlösung kommerziell gewonnenen menschlichen Fäkalienmaterials von gesunden Spendern (Innovative Research, USA, zertifizierter, von ISO, FDA, USDA und EPA zugelassener Anbieter) wurde durch Auflösen von 5 g in 50 ml sterilem Reinstwasser hergestellt. Aus aktiven Kulturen von CRL 2244, gezüchtet in MRS-Brühe und AB5075 in BHI-Brühe und eingestellt auf OD600 = 0,1, wurden zweihundert μl jeder Zelle mit der Zugabe von 900 μl Fäkalien und 900 μl BHI-Brühe kombiniert (Endvolumen 2 ml). ). Als Kontrollen wurden AB5075-Zellen verwendet. Nach 24-stündiger Inkubation bei 37 °C wurden die Lebensfähigkeit von AB5075 und Veränderungen in der Phänotypisierung bestimmt:

Zelllebensfähigkeit (KBE/ml): Verwendung von Differenzialmedien wie CLDE (mit und ohne Zusatz von Erythromycin 2 μg/ml), Levin; und selektive Medien wie CHROMagar™ Acinetobacter (Chromoagar, Paris, Frankreich).

Motilitätstest in Weichagar (0,5 % Agarose): Es wurden LB-Platten mit 0,5 % Agarose verwendet. Von den im Zelllebensfähigkeitstest erhaltenen Kolonien wurden Kolonien gepflückt und auf der Oberfläche der Motilitätsplatte ausgesät und 24 Stunden lang bei 37 °C inkubiert. Der Wachstumsdurchmesser wurde gemessen und als nicht beweglich (< 5 mm), mäßig beweglich (5–20 mm) oder hoch beweglich (> 20 mm) klassifiziert. Die Experimente wurden dreifach durchgeführt.

Antibiotika-Empfindlichkeitstests: Von den im Zelllebensfähigkeitstest erhaltenen Kolonien wurde die Empfindlichkeit gegenüber Cefepim (FEP), Ceftazidim (CAZ), Imipenem (IMP), Meropenem (MER), Cefiderocol (FDC), Amikacin (AK), Gentamicin ( GN), Ciprofloxacin (CIP), Trimethoprim/Sulfamethoxazol (TMS) und Tetracyclin (TE) unter Verwendung der Scheibendiffusionstechnik und Bestimmung der minimalen Hemmkonzentration von Cefiderocol (FDC) und Tetracyclin (TE) gemäß den von CLSI (2020) empfohlenen Verfahren.

Die während der aktuellen Studie generierten und analysierten Datensätze sind im Gene Expression Omnibus (GEO)-Repository verfügbar (GEO-Zugangsnummer GSE236782 oder Token-Nummer glcdkswudzkvzuv).

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Die Arbeit der Autoren wurde von NIH SC3GM125556 an MSR, R01AI100560, R01AI063517, R01AI072219 an RAB unterstützt; PICT2018-03233 an RR und PIP 2020-817 und PICT 2021-00458 an CR. Diese Studie wurde teilweise durch Mittel und/oder Einrichtungen unterstützt, die vom Cleveland Department of Veterans Affairs, Auszeichnungsnummer 1I01BX001974, an RAB vom Biomedical Laboratory Research & Development Service des VA Office of Research and Development und dem Geriatric Research Education and Clinical Center bereitgestellt wurden VISN 10 bis RAB. Der Inhalt liegt ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und gibt nicht unbedingt die offiziellen Ansichten der National Institutes of Health oder des Department of Veterans Affairs wieder. MRT und TS sind Empfänger eines Postdoktorandenstipendiums von CONICET.

Referenzzentrum für Laktobazillen (CERELA), CONICET, San Miguel de Tucumán, Tucumán, Argentinien

Cecilia Rodriguez, Camila Leal und Raúl Raya

Center for Applied Biotechnology Studies, Department of Biological Science, College of Natural Sciences and Mathematics, California State University Fullerton (CSUF), 800 N State College Blvd, Fullerton, CA, 92831, USA

Dema Ramlaoui, Nardin Georgeos, Briea Gasca und María Soledad Ramirez

Institut für biotechnologische und chemische Prozesse von Rosario (IPROBYQ, CONICET-UNR), Rosario, Argentinien

Tomas Subils

Institut für Molekular- und Zellbiologie von Rosario (IBR, CONICET-UNR), Rosario, Argentinien

Marisel R. Tuttobene

Leloir Institute Foundation-IIBBA CONICET, Buenos Aires, Argentinien

Rodrigo Sieira

Abteilung für Chemie und Biochemie, College of Natural Science and Mathematics, CSUF, Fullerton, USA

Nicholas T. Salzameda

Forschungsdienst und GRECC, Department of Veterans Affairs Medical Center, Louis Stokes Cleveland, Cleveland, OH, 44106, USA

Robert A. Bonomo

Abteilungen für Medizin, Pharmakologie, Molekularbiologie und Mikrobiologie, Biochemie, Proteomik und Bioinformatik, Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland, OH, 44106, USA

Robert A. Bonomo

CWRU-Cleveland VAMC Center for Antimicrobial Resistance and Epidemiology (Fall VA CARES), Cleveland, OH, 44106, USA

Robert A. Bonomo

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CR, DR, NG, BG, NTS, RR und MSR konzipierten die Studie und gestalteten die Experimente. CR, DR, NG, BG, CL, TS, MRT, RS, NTS, RR und MSR führten die Experimente sowie genomische und bioinformatische Analysen durch. MRT, TS, RS, NTS, CR, RAB, RR und MSR analysierten die Daten und interpretierten die Ergebnisse. CR, NTS und MSR steuerten Reagenzien/Materialien/Analysetools bei. CR, RS, NTS, RAB, RR und MSR haben das Manuskript geschrieben und überarbeitet. Alle Autoren haben das endgültige Manuskript gelesen und genehmigt.

Korrespondenz mit María Soledad Ramirez.

Die Autoren geben an, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Rodriguez, C., Ramlaoui, D., Georgeos, N. et al. Antimikrobielle Aktivität des Lacticaseibacillus rhamnosus CRL 2244 und seine Auswirkung auf die phänotypischen und transkriptionellen Reaktionen bei Carbapenem-resistentem Acinetobacter baumannii. Sci Rep 13, 14323 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-41334-8

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Eingegangen: 08. Juli 2023

Angenommen: 24. August 2023

Veröffentlicht: 31. August 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-41334-8

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